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01 TAE缓冲液

TAE缓冲液(TAE Buffer)是由三羟甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)和乙二胺四乙酸(EDTA)组成的缓冲液，英文名为三种组成成分的首字母。在分子生物学实验中常被用作DNA或RNA进行凝胶电泳时的缓冲液。是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04 mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚***熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2 mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。

50×TAE缓冲液是一种高浓度的Tris-乙酸-EDTA缓冲液储备溶液，常用于分子生物学中的核酸电泳。以下是配制1升50× TAE缓冲液的方法：

 1.1 试剂：

1. Tris碱：242克

2. 冰醋酸：57.1毫升

3. EDTA（二钠盐，二水合物）：37.2克

4. 蒸馏水：定容***1升

1.2 步骤：

1. 溶解Tris碱：称取242克Tris碱，加入约700毫升蒸馏水中，在一个1L大烧杯或烧瓶中搅拌。600ml去离子水也可以，切记不要加多，***多700ml！注意，不要加很多水，注意偏摩尔体积不一样！注意，超声加速溶解

2. 加入冰醋酸：小心地加入57.1毫升冰醋酸到溶液中。注意不要漏撒！

3. 加入EDTA：称取37.2克EDTA（二钠盐，二水合物，Na2EDTA·2H2O ），加入溶液中。EDTA可能需要一些时间溶解，特别是在pH值未调整的情况下。注意，超声加速溶解

4. 调整pH值（如有必要）：检查溶液的pH值，应在8.0左右。如果需要，可以使用NaOH或HCl调整pH值。不过按照上述比例，pH值通常是接近的。

5. 定容******终体积：一旦所有成分完全溶解并调整好pH值，用蒸馏水定容***1升。

6. 储存缓冲液：将50× TAE缓冲液转移到储存瓶中，并正确标记。可在室温下储存数月。

50× TAE缓冲液的***终浓度：

- 2 M Tris

- 1 M 冰醋酸

- 50 mM EDTA

1.3 工作溶液：

要配制1× TAE工作溶液，将50× TAE缓冲液按1:50稀释（例如，20毫升50× TAE缓冲液加980毫升蒸馏水）。

处理化学品时请务必小心，使用适当的个人防护设备（PPE），如手套和护目镜。

02 琼脂糖凝胶电泳

核酸电泳中常用的琼脂糖凝胶配制方法如下：

2.1 试剂与材料：

琼脂糖 TAE缓冲液（通常使用1× TAE缓冲液） 溴化乙锭（Ethidium Bromide，或其他安全的核酸染料） 电泳槽和电泳仪 微波炉或电热板 量筒、烧杯或锥形瓶 搅拌棒 模板和梳子

2.2 参考步骤：

选择琼脂糖浓度：

通常使用的琼脂糖浓度在0.7%***2%之间，取决于核酸片段的大小： 大片段（1kb以上）：0.7%-1%琼脂糖凝胶 中等片段（500bp-1kb）：1%-1.5%琼脂糖凝胶 小片段（100bp-500bp）：1.5%-2%琼脂糖凝胶

配制琼脂糖溶液：

根据所需浓度称取适量琼脂糖。例如，配制1%的琼脂糖凝胶，称取1克琼脂糖。 将琼脂糖加入100毫升1× TAE缓冲液中。一般45mlTAE加入0.43g琼脂糖。一个二分之一模具刚刚好；或者95mlTAE加入0.9g琼脂糖，刚好一整个模具。水适量多一点，考虑加热会蒸发损失！约1%即可，影响不大。

溶解琼脂糖：

将混合物放入微波炉中加热，直到琼脂糖完全溶解。每次加热30秒后取出搅拌，重复此过程直到溶液变得透明。 或者，可以使用电热板加热并搅拌直到琼脂糖完全溶解。一般微波炉高火2min。

冷却并加入染料：

将溶解的琼脂糖溶液冷却***大约60℃。如果使用溴化乙锭，在此时加入适量溴化乙锭（***终浓度约为0.5μg/ml）。注意溴化乙锭是致癌物，操作时应佩戴手套并在通风橱内进行。 若使用其他核酸染料，请根据相应说明加入。一般40ml胶趁热加2.5ul染料，并摇匀使之颜色均一。建议使用不致癌的染料！注意生物安全！！！

倒胶：

将凝胶托盘放置在水平的台面上，并插入梳子。 小心地将琼脂糖溶液倒入托盘中，避免产生气泡。让溶液完全覆盖梳子的齿。 让凝胶在室温下固化，通常需要20-30分钟。

移除梳子并准备电泳：

凝胶完全固化后，小心地移除梳子。 将凝胶托盘放入电泳槽中，加入足够的1× TAE缓冲液，确保凝胶完全浸没。

加载样品并运行电泳：

将样品混合装载染料后小心地加到凝胶孔中。 连接电源，根据样品大小和所需分辨率选择适当的电压进行电泳（通常在80-120V之间）。一般90V，约30-40min分离效果较好。

注意事项：

安全操作： 处理溴化乙锭时务必戴手套并在通风良好的地方操作。 溶液均匀性： 确保琼脂糖溶液均匀溶解并充分混合染料。 电泳时间： 根据实验需求，选择合适的电泳时间和电压，避免过长时间电泳导致样品跑出胶外。